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中性粒细胞胞外陷阱及Ⅰ型脱氧核糖核酸酶在类风湿性关节炎中相关性的体外研究
编辑: admin 来源: 未知 时间: 2020/7/31 12:03:26

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【摘要】:目的:探究类风湿性关节炎(rheumatoidarthritis,RA)患者外周血中性粒细胞胞外陷阱(neutrophilextracellulartraps,NETs)的形成情况与体外血清降解NETs过程,以及糖皮质激素对NETs诱导形成的影响,并测定RA患者血清Ⅰ型脱氧核糖核酸酶(DNaseⅠ)的活性,以期发现NETs的发生与降解以及血清DNaseⅠ活性,及其三者间关系在RA发病机制中的潜在作用。

方法:收集2016年3月至2016年11月于大连医科大学附属第二医院确诊的类风湿性关节炎患者65例,并同时收集年龄性别比例相当的30例健康体检者作为对照组。 收集并整理患者临床评分及各项实验室相关指标。 采集患者入院当天外周静脉血及血清,密度梯度离心法分离纯化中性粒细胞,同时血清冰冻保存。 流式细胞术测定中性粒细胞纯度。

用SytoxGreen荧光染料对纯化中性粒细胞染色,荧光显微镜下观察两组NETs形态并用免疫荧光染色技术分析NETs组成成分,并分析地塞米松干预RA患者血清诱导NETs形成情况和RA血清降解NETs情况。

辐射状酶扩散法测定血清DNaseⅠ活性。 对血清降解NETs能力及血清DNaseⅠ活性进行相关性分析,并比较NETs含量和血清DNaseⅠ活性与各项实验室指标的关系。

软件对NETs含量及血清DNaseⅠ浓度进行定量分析。

统计软件进行数据处理分析。 GraphpadPrism5软件进行图表绘制。 结果:例类风湿性关节炎(RA)患者的外周血中检测到了NETs的存在,且RA患者外周血NETs水平显著高于同期健康体检者外周血NETs水平(%±%±,);是一动态连续过程,NETs的成分组成包含DNA和组蛋白;患者外周血NETs含量与CRP、ESR以及DAS28评分呈正相关(r=,P=;r=,P=;r=,P=),而与RF和抗CCP抗体无关(r=,P=,n=65;r=,P=,n=65);4.用地塞米松预处理的中性粒细胞经体外诱导后产生的NETs水平显著低于未用地塞米松预处理的中性粒细胞经体外诱导产生的NETs水平(%±%±,);患者体外血清降解NETs比例显著低于健康体检者体外血清降解NETs比例(%±%±,);患者血清DNaseⅠ活性显著低于健康体检者血清DNaseⅠ活性(±/±/ml,);患者血清DNaseⅠ活性与CRP和ESR呈负相关(r=-,P=;r=-,P=),而与DAS28、RF和抗CCP抗体无关(r=-,P=,n=55;r=-,P=,n=55;r=,P=,n=55);患者血清DNaseⅠ活性与体外血清NETs降解比例呈正相关(r=,P=,n=35)。

结论:本实验证实了RA患者外周血中有NETs的存在,且其含量显著高于健康对照组(),NETs水平高低能反映疾病活动度情况。 与此同时,经观察发现NETosis是一动态连续过程,NETs成分组成包含DNA及组蛋白,推测其成分可能参与RA的发病机制。

体外实验发现,RA患者血清能诱导形成NETs,且经地塞米松预处理的中性粒细胞诱导生成的NETs含量显著低于未经地塞米松预处理的中性粒细胞诱导生成的NETs含量();RA患者血清降解NETs比例显著低于健康对照组(),RA患者血清DNaseⅠ活性显著低于健康对照组(),并且血清DNaseⅠ活性与疾病活动度有关。

血清DnaseⅠ活性与血清降解NETs比例呈正相关,提示RA患者血清降解NETs受损与血清DnaseⅠ活性不足有关。 总而言之,本次实验表明NETs的生成与降解在RA病生机制中起着重要作用,地塞米松可通过减少NETs形成缓解RA病情。

【学位授予单位】:大连医科大学【学位级别】:硕士【学位授予年份】:2017【分类号】:。

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